ساب کلونینگ ژن زیر‌واحد آلفای هورمون‌های گلیکوپروتئینی بخش پیشین غده هیپوفیز در یک وکتور بیانی سلول‌های پستان‌داران

  سابقه و هدف: هورمون‌های گلیکوپروتئینی مترشحه از هیپوفیز قدامی شامل هورمون‌های گلیکوپروتئینی انسانی شامل هورمون محرک تیروئید، هورمون لوتئینیزه‌ کننده، هومون محرک فولیکولی و گونادوتروپین کوریونی هستند که هر یک از دو زیر‌واحد آلفا و بتا تشکیل شده است. زیر‌واحد آلفا در همه هورمون‌های فوق مشابه است و از چهار اگزون و سه اینترون تشکیل شده است. زیر واحد بتا مسئول فعالیت اختصاصی هر یک از این هورمون‌ها است. هدف این مطالعه کلونینگ cDNA زنجیره آلفای هورمون‌های گلیکوپروتئینی در وکتور مناسب برای سیستم یوکاریوتی بود.   مواد و روش ‌ ها: به منظور کلونینگ cDNA زیر‌واحد آلفا هورمون‌های گلیکوپروتئینی از T-vector واجد ژن آلفا، به کمک یک جفت پرایمر، cDNA مجدداً آمپلیفیه گردید و در سایت‌های Bam HI و Not I پلاسمید pcDNA3.1 کلون گردید. پلاسمید نوترکیب به سلول E.coli Top10F  ترانسفورم شد و کلونی‌های واجد پلاسمید به‌وسیله Colony PCR انتخاب شدند. صحت پلاسمید تخلیص شده از این کلون‌ها ابتدا توسط هضم آنزیمی و نهایتاً به روش سکانسینگ بررسی شد.   یافته ‌ ها: آنالیز آنزیمی و سکانسینگ نشان داد که پلاسمید pcDNA3.1-F351 α دارای توالی پلاسمیدی صحیح می‌باشد و تطابق کامل با ژن آلفای هورمون‌های گلیکوپروتئینی گزارش شده در GenBank دارد.   نتیجه ‌ گیری: این پلاسمید به دلیل ساختار صحیح جهت انتقال به سیستم یوکاریوتی و ارزیابی بیان مناسب می‌باشد.